TBE Tamponunu 3 Kolay Adımda Nasil Üretir

TBE tamponu, Tris baz, borik asit ve EDTA'dan (veya Tris-borat-EDTA'dan) oluşan bir tampon çözeltidir. Bu tampon sıklıkla PCR amplifikasyonu, DNA saflaştırma protokolleri veya DNA klonlama deneylerinden sonuçlanan DNA ürünlerinin analizinde agaroz jel elektroforezi için kullanılır.

TBE tamponu, sınır enzim sindirimlerinin ufak ürünleri gibi daha küçük DNA fragmanlarının (MW <1000) ayrılması için özellikle yararlıdır.

TBE daha büyük tamponlama kapasitesine sahiptir ve TAE tamponundan daha keskin çözünürlük sağlayacaktır. TAE tamponu, Tris baz, asetik asit ve EDTA (Tris-asetat-EDTA) içeren bir çözeltidir.

TBE genellikle TAE'den daha pahalıdır ve DNA ligazını inhibe eder; bu da DNA saflaştırma ve ligasyon adımlarının kullanılması durumunda sorunlara neden olabilir. Takip eden üç basit adım ile TBE arabelleğini nasıl oluşturacağınızı öğrenin. Bu arabellek oluşturmak yaklaşık 30 dakika kadar sürmemelidir. İşte:

EDTA'nın Stok Çözeltisini Hazırlayın

Zamanından önce EDTA (etilendiamin tetraasetik asit) solüsyonu hazırlanmalıdır. PH değeri yaklaşık 8'e ayarlanana kadar EDTA çözeltiye tamamen girmez. 0.5 M EDTA stok çözeltisi 500 ml'lik bir çözelti için, 93,05 gram EDTA disodyum tuzu (FW = 372,2) tartın. Ardından, 400 mililitre iyonu giderilmiş suda çözündürün ve NaOH ile pH'ı ayarlayın. Bundan sonra, çözümü 500 mililitreye kadar tamamlayın.

TBE'nin Stok Çözeltisini Hazırlayın

54 g Tris bazını (FW = 121.14) ve 27.5 g borik asit (FW = 121.14) ağırlığındaki konsantre (5x) stoklu bir TBE solüsyonu yapın. = 61.83) ve her ikisi de yaklaşık 900 mililitre deiyonize su içerisinde eritilir. Ardından 20 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0) ilave edin ve çözeltiyi 1 litrelik nihai hacme ayarlayın.

Bu çözelti oda sıcaklığında saklanabilir, ancak eski çözeltilerde bir çökelti oluşacaktır. Tamponu cam şişelere koyun ve bir çökelti oluşursa atın.

TBE Çalışma Çözeltisi Hazırlayın

Agaroz jel elektroforezinde, TBE tamponu, 0,5x konsantrasyonda (konsantre stoğun 1: 10 seyreltilmesi) kullanılabilir. Stok solüsyonunu deiyonize su ile 10x seyreltin. Son çözünen konsantrasyonlar 45 mM Tris-borat ve 1 mM EDTA'dır. Tampon artık bir agaroz jeli çalıştırmak için hazırdır.

İhtiyacınız Olanlar

TBE arabelleği yapmak için sadece dört maddeye ihtiyacınız olacak. Bu listedeki kalan maddeler ekipmanlardır. Gerekli dört madde EDTA disodyum tuzu, Tris baz, borik asit ve deiyonize sudur.

Ekipmanlara gelince, uygun bir şekilde bir pH metre ve kalibrasyon standartlarına ihtiyaç duyacaksınız. Buna ek olarak, 600 mililitre ve 1500 mililitre püskürtücüler veya şişeler gerekecek. Ekipmanınızın yuvarlaklaştırılması, dereceli silindirler, karıştırma çubukları ve karıştırma plakalarıdır.

Başlamadan önce ihtiyacınız olan her şeye sahip olduğunuzdan emin olmak için kullandığınız laboratuardaki envanteri kontrol edin. Hiçbir şey, bir çözüm hazırlarken ortadan kaybolmaktan daha kötüdür, çünkü uygun malzemeleri kullanmazsınız.

Laboratuvarınız okuldaysa veya çalışma alanınızda çalışıyorsa, stokta bulunan tüm öğeleri bulunduklarını görmek için uygun personele danışın. Bunu yapmak sonunda size zaman ve enerji kazandırabilir.