Protein İzolasyonu spesifik etkinliğinin önemini

Spesifik aktivite, bir enzimin bir substrata reaksiyon hızını ölçmek için kullanılan bir terimdir.

Spesifik enzim aktivitesi (kısa aktivite) enzim saflığının bir ölçümüdür ve birimler / mg olarak alıntılanmıştır. Protein miktarı (mg) tipik olarak daha az olduğu için bu değer bir enzim preparatı daha saflaştıkça daha büyük olur, ancak reaksiyon oranı aynı kalır (veya girişimlerin azaltılması veya inhibitörlerin giderilmesi nedeniyle artabilir).

Spesifik Aktivite: Enzim Kinetiğini Ölçme

Biraz geçmişte olduğu gibi enzimler, bir reaksiyonun oluşması için aktivasyon enerjisi miktarını azaltmada katalizör olarak görev yapan proteinlerdir. Aktivasyon enerjisi, reaksiyonların "başlaması" için gerekli olan enerjidir; çünkü birçok reaksiyon çoğu zaman termodinamik olarak mümkün değilse çok hızlı gerçekleşmez (veya hiç görülmez).

Enzimler, reaksiyona giren maddelerin ürün üretmek için reaksiyona girerek reaksiyona girdiği belirli bir bölgede (aktif bölge olarak da bilinir) spesifik reaksiyonları katalize eder. Substratlar yalnızca kendilerine özgü aktif sitelere sahiptir, böylece başka hiçbir madde aynı bölgede bağlanmaz veya reaksiyona girmez. Bir kilit ve anahtar gibi, her enzim yalnızca belirli bir reaksiyona neden olur (bazı istisnalar dışında).

Saflık derecesini göstermek için protein izolasyon yöntemlerinde spesifik aktivite kullanılır. Almakta olduğunuz saf enzimin tam miktarını belirtmek için enzim satın alırken bu birimi bilmek önemlidir.

3'ten büyük ->

enzim kinetiği (bir alt-tabaka ile bir enzimin reaksiyon oranı - ya da yüzey) ölçülürken>, spesifik aktivite substrat miktarı enzim dönüştürür (reaksiyon katalizörlü), ortalama olarak tanımlanmaktadır mg protein, enzim preparatında, birim zaman başına.

Spesifik aktiviteye bir örnek:

İzole edilen enzimin spesifik aktivitesi saflaştırmadan önce 150 umol / dakika / mg protein ve saflaştırmadan sonra 800 umol / dakika / mg olarak ölçüldü.

• Özgül etkinlik, enzim saflığının önemli bir ölçümüdür. Saf bir enzimin farklı serileri aynı değere sahip olmalı ve bir enzim solüsyonunun birçok kez seyreltilmesi bile, farklı enzim aktivite değerleri olsa bile aynı özdeş etkinlik değerlerine sahip olacaktır. Bunun nedeni, spesifik aktivitenin hesaplanmasında pay (birim / ml) ve payda (mg / ml) eşit olarak etkilenmesidir.

Spesifik aktivite, faaliyete göre çok farklı olmakla birlikte spesifik faaliyete ilişkin hesaplama halen faaliyet değerine bağlıdır. Bu, belirtilen spesifik aktivite değerinin enzim ünitesinin tanımına da bağlı olduğu anlamına gelir.

Beklenen spesifik aktivite değerinden daha düşük olan enzim grupları, değiştirilmiş veya yabancı maddelerle karıştırılmış enzim molekülleri içerebilir.

Enzim Aktivitesini Etkileyen Faktörler

Bir enzimin, farklı laboratuvarlarda ölçülen farklı ölçülen etkinlik değerlerine sahip olabilmesi mümkündür (ölçülen etkinlikte gerçek farklılıklar, farklı ünite tanımlarının kullanılmasından kaynaklanan belirgin farklılıklar değil).

Testin gerçekleştirilme şekli (enzimlerin saflığını belirlemek için test yöntemi) bildirilen aktivite değerlerini etkileyecektir. Örneğin, enzimler genelde 37 derecelik sıcaklıklarda 20 dereceye kıyasla daha aktiftir, bu nedenle bir deney 21 derece celsius'da gerçekleştirilirse değerler 32 derece santigrat derece sıcaklıklarında gerçekleştirilen testlerden farklı olacaktır (tipik olarak , analizler 20-37 ° C arasındaki bir sıcaklıkta gerçekleştirilir).

Böylece, enzim ünitesinin tanımı daha iyi ifade edilecektir: 1 birim (U), standart koşullar altında dakika başına 1 nmol substratın reaksiyonunu katalizleyen enzim miktarıdır.