Kısıtlama Enzimleri Hakkında

Kısıtlama enzimleri hakkında ne biliyorsunuz? Bu inceleme ile yaptıklarının ve neyin öneminin önemli olduğunu daha iyi anlayın.

Kısıtlama Enzimlerini Tanımlama

Kısıtlama endonükleazları, DNA moleküllerini kesen bir enzim sınıfıdır. Her enzim DNA zincirindeki nükleotidlerin benzersiz bir dizisini tanır. Bu sekanslar genellikle yaklaşık 4 ila 6 baz çift uzunluğundadır. Sekanslar palindromiktir, çünkü ücretsiz DNA zincirinin sadece ters yönde aynı dizisi vardır.

Başka bir deyişle, her iki DNA dizisi de aynı yerde kesilir.

Bu Enzimlerin Bulunduğu Yerler

Sınırlama enzimleri, biyolojik rollerinin hücrenin savunmasına katılmak olduğu birçok farklı bakteri suşunda bulunur. Bu enzimler, hücrenin içine giren yabancı (örneğin viral) DNA'yı "yok" ederek "kısıtlar". Konakçı hücrenin kendi kısıtlama enzimlerine özgü sitelerde kendi DNA'sını metilatüre eden bir kısıtlama değiştirme sistemi vardır ve böylelikle bölünme önlenir. 100'den fazla farklı nükleotid sekansı tanıyan 800'den fazla bilinen enzim keşfedildi.

Biyoteknolojide Kullanım

Bireyler arasındaki parçacık uzunluğu farklılıklarını incelemek için kısıtlama enzimleri biyoteknolojide DNA'yı daha küçük ipliklere kesmek için kullanılır (Kısıtlama Fragmanı Uzunluğu Polimorfizm - RFLP). Gen klonlaması için de kullanılırlar.

RFLP teknikleri, bireylerin veya birey gruplarının, genomun belirli alanlarında gen dizileri ve kısıtlama bölünme modellerinde belirgin farklılıklara sahip olduğunu belirlemek için kullanılmıştır.

Bu benzersiz alanların bilgisi, DNA parmak izinin temelini oluşturur. Bu yöntemlerin her biri, DNA fragmanlarının ayrılması için agaroz jel elektroforezinin kullanımına bağlıdır. Tris baz, borik asit ve EDTA'dan oluşan TBE tamponu, DNA ürünlerini incelemek için agaroz jel elektroforezi için yaygın olarak kullanılır.

Kısıtlama Enzimlerinin Türleri

Üç farklı kısıtlama enzimi türü vardır. Tip I DNA'yı rasgele yerlerde, tanıma alanından 1000 veya daha fazla baz çiftiyle keser. Tip III, şantiyeden yaklaşık 25 baz çifti keser. Tip I ve III, ATP gerektirir ve çoklu alt üniteleri olan büyük enzimler olabilir. Biyoteknolojide ağırlıklı olarak kullanılan tip II enzimler ATP'ye ihtiyaç duymadan tanınmış dizide DNA'yı keserler ve daha küçük ve daha basittir.

Tip II restriksiyon enzimleri, izole edildikleri bakteri türlerine göre isimlendirilir. Örneğin, EcoRI enzimi E'den izole edildi. coli . Halkın çoğu E'yi biliyor. coli yemek yangınları.

II. Tür sınırlama enzimleri, her iki ipliği tanıma dizisinin merkezinde mi yoksa her iplikten tanıma dizisinin bir ucuna mı yakınlaştığına bağlı olarak iki farklı kesim türü üretebilir.

Eski kesim, hiçbir nükleotid çıkıntısı olmaksızın "kör uçlar" ü üretecektir. İkincisi, "yapışkan" veya "yapışkan" bitkiler üretir, çünkü elde edilen her DNA parçası, diğer parçaları tamamlayan bir çıkıntıya sahiptir. Her ikisi de, rekombinant DNA ve proteinlerin üretimi için moleküler genetikte faydalıdır.

Bu DNA biçimi öne çıkmaktadır, çünkü başlangıçta birbirine bağlı olmayan iki veya daha fazla farklı ipin bağlanmasıyla (birbirine yapışarak) üretilmektedir.