Birkaç Adımlar

TAE tamponu, Tris baz, asetik asit ve EDTA (Tris-asetat-EDTA) içeren bir çözeltidir. Tarihsel olarak, PCR amplifikasyonu, DNA saflaştırma protokolleri veya DNA klonlama deneylerinden sonuçlanan DNA ürünlerinin analizlerinde agaroz jel elektroforezinde kullanılan en yaygın tampondur.

Bu tampon, düşük iyonik dayanıma ve düşük tamponlama kapasitesine sahiptir. Büyük (> 20 kb) DNA parçalarının elektroforezine en uygundur ve sıklıkla değiştirilmesi veya daha uzun (> 4 saat) jel çalışma süreleri için devridaim yapılması gerekir.

Bunu göz önünde bulundurarak, tamponun birkaç yığını düşünebilirsiniz.

Tamponun kolay yapılması ve adımların hızlı bir şekilde gerçekleştirilebilmesi nedeniyle, bir seferde birden fazla parti hazırlamak özellikle zaman alıcı veya zorluk çekmemelidir. Aşağıdaki talimatları kullanarak TAE tamponu yapmak sadece 30 dakika alacaktır. İşte:

EDTA Stok Çözeltisi Hazırlayın> Önceden EDTA (etilendiamin tetraasetik asit) solüsyonu hazırlanır. PH değeri yaklaşık 8 ° C'ye ayarlanana kadar EDTA tamamen çözeltiye girmeyecektir. 0.5 ml EDTA'nın 500 ml'lik bir stok solüsyonu için 93.05 gram EDTA disodyum tuzu (FW = 372.2 ). 400 mililitre deiyonize suda eritilir ve pH'ı sodyum hidroksit (NaOH) ile ayarlar. Çözümü 500 mililitre nihai bir hacme ekleyin.

3'ten büyük ->

kamçı kadar TAE bir stok çözeltisi

(FW = 121. 14) Tris baz 242 gram tartıp ayırma ve yaklaşık olarak 750 çözündürülerek TAE bir konsantre edildi (50 x) stok solüsyonu yapmak mililitre deiyonize su.

57.1 mililitre buzlu asit ve 100 mililitre 0.5 M EDTA (pH 8.0) ekleyin. Bundan sonra, çözümü son 1 litre hacme ayarlayın. Bu stok solüsyonu oda sıcaklığında saklanabilir. Bu tamponun pH değeri ayarlanmaz ve yaklaşık 8 olmalıdır. 5.

TAE Çalışma Çözeltisini Hazırlayın

1x TAE tamponunun çalışma solüsyonu, stok solüsyonunu 50 x deiyonize su ile seyrelterek yapılır.

Son çözünen konsantrasyonlar 40 mM'dir. Tris asetat ve 1 mM EDTA. Tampon artık bir agaroz jeli çalıştırmak için hazırdır.

Arabellek için İhtiyacınız Olan Şey

TAE tamponu yalnızca hızlı ve basit bir talimat seti gerektirdiğinden, bunun için gerekli malzeme miktarı aşırı değildir. Sadece EDTA disodyum tuzu, Tris baz ve buzlu asetik asit gerekir.

Tamponun hazırlanması için ayrıca pH metre ve kalibrasyon standartları gereklidir. Ayrıca mezun silindirlerin yanı sıra 600 mililitre ve 1500 mililitre beher veya şişelere de ihtiyacınız olacak. Son olarak, deiyonize suya, karıştırma çubuklarına ve plakaları karıştırmaya ihtiyacınız olacak.

Kaplama Up

Tamponu nereden bulacaksınız - bir okul sitesinde, bir çalışma yerinde veya eviniz gibi başka bir yerde mi yapmayı düşünüyorsunuz?TAE tamponu için yukarıdaki malzemelerin hepsine sahip olduğunuzdan emin olmaya başlamadan önce envanteri kontrol edin.

Malzeme bedelini ödemek zorunda kalmayı istemiyorsanız, tamponu evinizin dışına çıkarmayı tercih etmeniz önerilir. Çevrimiçi olarak ihtiyaç duyduğunuz materyalleri kolayca sipariş verebilir veya onlar için bir uzmanlık mağazasını ziyaret edebilirsiniz.