IHC

PBS (fosfat tamponlu salin), immünhistokimyasal boyama için yaygın olarak kullanılan bir tampondur ve biyolojik araştırmalarda yaygın olarak kullanılır. Solüsyonların ozmolarite ve iyon konsantrasyonları insan vücudununkine (izotonik) uygundur.

PBS, sodyum hidrojen fosfat, sodyum klorür ve bazı durumlarda potasyum klorür ve potasyum dihidrojen fosfat içeren su bazlı bir tuz çözeltisidir.

İHC için immünofloresan boyama İmmunofloresan boyama ilk immünhistokimyasal (IHC) boyama yöntemiydi. Antijen-antikor bağlanma tepkisinin temel özelliği ile antikorlar, antikorlarla konjuge edildiğinde floresan boyalar kullanılarak görünür hale gelir. Süreç, floresan mikroskop altında belirli bir dalga boyunun heyecan verici ışığıyla aktive edildiğinde gerçekleşir. İmmunohistokimya, biyolojik dokularda antijenlere spesifik olarak bağlanan antikorların prensibi kullanılarak bir doku kesitindeki hücrelerdeki antijenler (örn., Proteinler) tespit etme prosesine ilişkindir.

Fosfat Tamponlu Salin (PBS) Kullanımları Fosfat tamponlu salin birçok izolata sahiptir ve birçok hücrede toksik değildir. Maddeleri sulandırmak için kullanılabilir ve hücreleri içeren kapları durulamak için kullanılır. PBS, biyomoleküllerin kurutulması için yöntemlerde seyreltici olarak kullanılabilir, çünkü içindeki su molekülleri, maddenin etrafında (örneğin protein) kurutulacak ve katı bir yüzeye immobilize olacak şekilde yapılandırılacaktır.

Maddenin suya yapışan ince filmi denatürasyonu veya diğer yapısal değişiklikleri önler. Karbonat tamponları aynı amaç için kullanılabilir ancak daha az etkilidir. Elipsometride protein adsorpsiyonunu ölçerken bir referans spektrum almak için PBS de kullanılabilir.

PBS hazırlanması

PBS hazırlamak için birçok farklı yol vardır.

Bazı formüllerde potasyum yoktur, bazıları kalsiyum veya magnezyum içerir. Aşağıdaki tampon reçetesi, nispeten kolay olup, 10X PBS stok solüsyonu (0.1M) içindir. Tween eklemek için bir seçenek de sağlanmaktadır. Bütün işlem yaklaşık 10 dakika sürer.

Fosfat Tamponlu Tuz (PBS) Nasıl Yapılır Aşağıdakileri tartın: 10.9 g susuz sodyum fosfat dibazik (Na2HP04), 3.2 g susuz sodyum fosfat monobazik (NaH2P04) ve 90 g sodyum klorür (NaCl).

Yukarıdakilerin hepsini 1 L damıtılmış suda çözün.

pH'ı 7'ye ayarlayın. 4.

1. Çözümü 1 L'lik bir son hacme kadar yapın.
2. (opsiyonel olarak)% 0.5 Tween 20 içeren bir solüsyon için, 1L solüsyona 5mL Tween 20 ilave edin.
3. Kullanmadan önce 10X seyreltin ve gerekiyorsa pH değerini tekrar ayarlayın.
4. PBS Tampon Yapma İpuçları
5. Oda sıcaklığında muhafaza edin.
6. Susuz olmayan reaktifler ikame edilebilir, ancak eklenen su moleküllerini yerleştirmek için her birinin uygun kütlesini yeniden hesaplamanız gerekir.

PBS Tamponu Yapmanız Gerekenler

• Sodyum fosfat monobazik (susuz)
• Sodyum fosfat dibazik (susuz)

Sodyum klorür

• Ölçek ve tartım tekneleri
• Manyetik karıştırıcı ve karıştırma çubuğu > pH probu, kalibre edilmiş ve pH'ı ayarlamak için uygun çözeltiler
• 1 L hacim şişesi
• Tween 20 (isteğe bağlı)